导读
“瘦肉精”属于β-激动剂类化合物，包括盐酸克仑特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇等十几种物质，是一类动物用药的统称，属于肾上腺类神经兴奋剂。任何能够促进瘦肉生长、抑制动物脂肪生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。瘦肉精在减少脂肪增加瘦肉方面的作用非常明显，能让猪的单位经济价值提升不少，但也存在引发心律不齐甚至是心脏病等极具危险性的副作用。近年来（年），因食用被“瘦肉精”污染的食物导致中毒事件屡有发生，且后果极其严重，引起了世界各国的高度重视。
检验方法为了保证畜产品质量安全，保护人类健康，许多国家都禁止在食源性动物的生产中使用盐酸克伦特罗，美国食品与药品监督管理局（FDA）将肉品中的盐酸克伦特罗残留作为必检项目，欧盟也严禁在饲料中添加“瘦肉精”类药物。我国虽然于年提出禁止使用“瘦肉精”类药物，但在畜牧业生产中“瘦肉精”的使用仍屡禁不止，如：在年河南省和江苏省发生济源双汇的“瘦肉精”事件以及年“3.15晚会”中曝光的沧州青县瘦肉精羊肉问题，都具有很大的社会影响力。
依据《GB/T-动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法》，试样中的β-激动剂经过酶解，用高氯酸调节pH值，沉淀蛋白后离心，上清液用氢氧化钠调节pH后用异丙醇-乙酸乙酯提取，用阳离子交换柱净化，采用液相色谱-串联质谱法进行测定，内标法定量。
图-1.盐酸克伦特罗的结构式
图-2.莱克多巴胺的结构式
图-3.硫酸沙丁胺醇的结构式
图-4.特布他林的结构式
应用方案仪器与耗材
FotectorPlus高通量全自动固相萃取仪；
AutoEVA60全自动平行浓缩仪；
AgilentII/高效液相色谱-串联质谱
MCX固相萃取柱（RayCure，60mg/3mL）
浓缩全自动氮吹浓缩仪
净化高通量全自动固相萃取仪
试剂
乙酸乙酯、异丙醇、甲醇均为色谱纯；甲酸、高氯酸、氨水、氢氧化钠；β-盐酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶。
0.2mol/L乙酸钠缓冲液：称取13.6g乙酸钠，溶解于ml水中，用适量乙酸调节pH至5.2。
标准品：莱克多巴胺盐酸盐，克伦特罗盐酸盐，沙丁胺醇，特布他林硫酸盐，ng/ml。
内标物：沙丁胺醇-D3，克伦特罗-D9，10ng/ml。
样品制备
酶解
准确称取5g（精确到0.01g）经捣碎的样品于50mL离心管内，加入0.2moL/L乙酸钠溶液（pH=5.2）20mL，再加入β-盐酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶μL，漩涡混匀，于37℃下避光水浴水解12h。
提取
添加1ml的内标工作液于待测样品中，加盖置于水平振荡器震荡15min，0r/min高速离心10min，准确取10mL上清液于另一50mL离心管中，用高氯酸调节PH至1.0±0.3，r/min离心5min，将上清液转移至另一50mL离心管中，用10moL/L氢氧化钠溶液调节pH至11，加入4~5g氯化钠，加入异丙醇：乙酸乙酯=6:mL，充分提取，r/min离心5min，吸取全部有机相到睿科全自动氮吹浓缩仪EVA-60plus50℃下氮气吹干，加入0.2M乙酸铵溶液5mL溶解，超声混匀，使残渣充分溶解后备用。
净化
将MCX固相萃取柱安装在RaykolFotectorPlus高通量全自动固相萃取仪上，依次用甲醇3mL、水3mL活化。备用液全部过柱，用水2mL、2%甲酸水2ml、甲醇2mL依次淋洗，抽干，用5％氨水甲醇溶液2mL洗脱，收集洗脱液，使用EVA-60plus全自动氮吹浓缩仪于40℃水浴氮气吹干，用10％乙腈水溶液（含0.1%甲酸）1.0mL溶解，滤过，液相色谱-串联质谱测定。具体的固相萃取方法见图。
FotectorPlus固相萃取方法
液质检测条件
液相条件
液相梯度洗脱条件
质谱仪器参数
MAR参数
图54种瘦肉精类MRM色谱图
结果与讨论为了验证该方法的回收率，本实验分别在猪肉样品中加入盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、特布他林4种混合标准品进行加标回收验证(n=3)，加标水平为0.5ug/kg，数据如表-2所示。加标回收率在87.8-.4%之间，RSD值控制在10%以内。说明该方法能够很好地运用于猪肉中瘦肉精残留量的检测。
表-2.猪肉样品加标回收率及RSD值
注：其中克伦特罗的内标为克伦特罗-D9；沙丁胺醇、特布他林与莱克多巴胺的内标为沙丁胺醇-D3。
本解决方案操作方便、提取和浓缩效率高、回收率好。符合GB/T-《动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法》要求。
EVA系列全自动平行浓缩仪可以自动完成样品的浓缩，采用氮吹针追随的方式使得浓缩进程更快，并节省氮气；FotectorPlus高通量全自动固相萃取仪采用全自动操作，可以排除人员操作带来的误差，从活化到上样、洗脱一步到位，六通道同时进行；同时FotectorPlus能够实现高通量处理，最多一天能够处理个样品，省时省力，真正为批量检测提供帮助。
