乙酸的分析在果酒工业与临床实验室中都有重要值。果酒中乙酸的含量变化相当大，而且一般都很高(约毫克/升)。果酒和果汁中乙酸的检测可以做得十分准确，因为其中的乙酸含量高，而且样品不需要进行预处理。
人血清中乙酸值仅约0.03~0.1微克分子/毫升，而且用一般的酶法检测常会遇到许多干扰，需要进行特殊的去蛋白作用和样品处理。
混杂在样品中的乳酸和丙酮酸可以通过特殊的蒸馏除去。乙酸在溶液中非常稳定，但是样品要尽快进行分析以避免细菌生长。
乙酰磷酸作为代谢途径的中间物，它在微生物学和生物化学中有一定的重要性。乙酰磷酸在溶液中很不稳定，检测必须在半小时内完成。
一、以乙酸激酶作为乙酸或乙酰磷酸的检测试剂
对于乙酸的检测来说，乙酸激酶(AK，,ATP:乙酸磷酸转移酶，EC.2.7.2.1)可能是一种最灵敏精确的试剂，大肠杆菌来源的酶已有几家公司作成商品供应。它的某些性质如下：
此酶不作用甲酸、丁酸以及这些酸和乙酸的卤代衍生物与羟基化衍生物。
检测应用下述偶联反应系统：
总反应为：
其中PTA为磷酸转乙酰酶(乙酰-CoA：正磷酸乙酰基转移酶，E.C.2.3.1.8)，CS为缩合酶(柠檬酸草酰乙酸解酶E.C.4.1.3.7)，MDH为苹果酸脱氢酶(L-苹果酸：NAD氧化还原酶，E.C1.1.1.37)。MDH中必须没有LDH，而且上述所有酶制剂中都必须不含有草酸脱羧酶，NADH氧化酶以及氨基转移酶。
CoA只需要加催化量，因为它可在反应中再生；草酰乙酸则通过反应从稳定的L-苹果酸生成。测定NADH在入最大=nm吸光率的降低即等于乙酸的浓度。用带有六个比色池自动转换器的比色计，一次可以测定4份样品，变异系数约为1.7%。
乙酰磷酸或者根据反应，并偶联反应测定NADH吸收的升高，或者根据反应测定乙酰-CoA在nm的吸光率，因为乙酰-CoA在这一波长的吸收比CoA强得多。变异系数为3.6%。丙酰磷酸和丁酰磷酸的反应速度都比较低。
如果样品中的乙酸和乙酰磷酸都要测定，可以先通过上述反应检测乙酰磷酸。
二、乙酸激酶和羟胺
按照这种方法，反应形成的乙酰磷酸进一步和羟胺反应形成乙酰异羟肟酸;
乙酰异羟肟酸的烯醇形式在酸性溶液中能和正铁盐形成红到红紫色络合物，它的深度和乙酸成比例，测定范围为0.25~2.0微克分子。此法灵敏度要低些，而且脂肪酸酯、脂肪酸内酯、酸酰胺以及其它一些化合物常产生很高的空白值。但是，它对于乙酸浓度相当高的样品的检测还是有用的变异系数约5%。
三、乙酸的其它检测方法
乙酸可用鸽肝乙酰-CoA合成酶(乙酸：CoA合成酶，AMPE.C.6.2.1.1)进行分析，此酶化下述反应：
这个反应和芳香胺乙酰基转移酶(乙酰CoA：芳香胺N-乙酰基转移酶，E.C.2.3.1.5)反应偶联就能进行跟踪：
测定对-氨基苯磺酰胺(最大=nm)的移除，它和乙酸的含量相关。
此法对乙酸具有很高的选择性，丙酸的反应速度约为乙酸的1/，丁酸也只有1/80左右。不过它有一个缺点，即反应结果不是化学计量的，得率大约85%，而且总的转化百分数取决于酶浓度。
这种检测还有一个主要缺点，即没有商品酶供应。但实验者可根据文献自己制备。
有文献设计了一种检测乙酸的酶电极。他们应用的是固定化醇氧化酶(E.C.1.1.3.13)，这种酶既能和乙酸反应，也能和乙醇反应。干扰来自甲酸、丙酸以及乙醇和丙醇，甲醇反应则极慢。
有文献推荐用苹果酸脱氢酶并偶联荧光指示剂反应以检测乙酸，检测浓度范围为10~微克乙酸/毫升，试卤灵形成的速度f/分钟(入激发=nm，入发射=nm)比例于乙酸含量。
苹果酸脱氢酶(E.C.1.1.1.37，猪心，I型)是一种很不专一的酶系统，能催化多种a-羟酸和非羟酸氧化。除乙酸外，还可测定己二酸(~微克/毫升)、二苯基羟乙酸(5~微克/毫升)、氯乙酸(~微克/毫升)、DL-柠檬酸(~微克/毫升)、甲酸(10~微克/毫升)、戊二酸(~微克/毫升)、羟乙酸(20~微克/毫升)、D-异柠檬酸(20~微克/毫升)、L-苹果酸(01~20微克/毫升)、丙二酸(20~微克/毫升)、草酸(30~微克/毫升)、酞酸(50~0微克/毫升)、DL-琥珀酸(50~0微克/毫升)以及D-酒石酸(~3,微克/毫升)等。
