山梨醇脱氢酶SDH特性及测定方法提 [复制链接]

山梨醇脱氢酶Sorbitoldehydrogenase,SDH，EC.1.1.1.14又称山梨糖醇脱氢酶；艾杜醇脱氢酶（ID），催化山梨醇脱氢生成果糖，是调控生物体内山梨醇含量的关健酶之一，主要分布于肝脏，肾、脑、心、脾等组织中，具有不完全氧化多种羟基化合物的特性。检测山梨醇脱氢酶活性有助于诊断肝脏损伤。

一、概况

1.反应式

2.米氏常数

3.专一性

此酶能催化许多底物发生脱氢作用，使核糖醇催化为D-核酮糖，木糖醇催化为木酮糖，D-山梨糖醇催化为D-果糖,D-艾杜糖醇催化为L-山梨糖，阿卢糖醇催化为D-阿卢糖。然而，赤藓糖醇、D-与L-阿糖醇、D-艾杜糖醇、D-甘露糖醇、D-塔罗糖醇以及许多其它的糖醇皆不能被此酶氧化，而且，D-葡萄糖、6-磷酸果糖、丙酮酸、a-酮戊二酸、乙醛以及许多其它化合物亦不能被此酶还原。NADP(H)不能代替NAD(H)。

4.抑制剂

CN-、Ag+、Hg2+、硼酸、EDTA、单碘乙酸以及二巯基乙醇皆为抑制剂。

5.纯度要求

此酶作为试剂使用，所需的纯度至少应为25单位/毫克，而含腺苷脱氨酶(ADA)量应少于0.01%，含L-谷氨酸脱氢酶(GIDH)量应少于0.02%，含L-乳酸脱氢酶(LDH)及苹果酸脱氢酶(MDH)量应少于0.05%。

6.意义

鉴于体液、心脏和骨骼肌中不含有山梨糖醇脱氢酶(SDH),而仅在前列腺、肾与肝中含有此酶，特别是患肝病时此酶含量特别高，因此,血清中此酶含量可以认为是患传染性、中毒性或缺氧等疾病而引起的肝细胞损伤的一种特异性指标。

患继发的慢性肝炎、肝硬化以及迁移性肝病等疾病时，血清中SDH活性会有所升高。然而，患急性肝病，例如，急性肝炎、胆管梗阻伴有严重肝充血的急性心衰竭以及由于肝硬化引起的坏死性肝病等疾病时，则发现此酶活性急剧增加。患梗阻性黄疸时，此酶仅出现微略的上升。严重中毒时，SDH酶活性则很高。

SDH的测定有很大价值，特别与碱性磷酸酯酶结合起来，则价值更大。

7.稳定性

此酶保存在4℃下十分稳定。

二、测定方法

山梨糖醇脱氢酶通常根据其逆向反应加以测定。

于最大吸收波长nm处跟踪NADH的减量。若计算在30℃时SDH活性单位，可将吸光率差值/分乘以5.，即得出相应活性单位。

另一种检测方法，山梨醇脱氢酶SDH催化山梨醇脱氢生成果糖，同时还原NAD+生成NADH，生成的NADH能将电子传递给NBT生成紫色的甲臜，在nm处检测，根据这一原理可以计算SDH活性。

对此酶尚可使用D-山梨糖醇与NAD作底物进行测定，即根据逆向反应原理，以荧光法跟踪NADH荧光度的减量或通过正向反应跟踪NADH荧光度的增量。