北京白癜风医院 https://jbk.39.net/yiyuanfengcai/video_bjzkbdfyy/还原型谷胱甘肽（GSH）检测试剂盒（DTNB比色法）
产品货号：BA
产品规格：T
产品简介：
谷胱甘肽(glutathione，GSH)广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中，参与组织细胞的许多功能活动，能够帮助保持正常的免疫系统功能，是一种氧自由基消除剂，保护组织细胞免受氧化损伤，并具有抗氧化作用和整合解毒作用。还原型谷胱甘肽(GSH)是一种由谷氨酸(Glu)、半胱氨酸(Cys)和甘氨酸(Gly)残基组成的含γ-酰胺键和巯基(-SH)的天然三肽，相对分子量为，半胱氨酸上的巯基为其活性基团，常简写为G-SH或GSH。GSH与某些药物(如扑热息痛)、毒素(如自由基、碘乙酸、铅、汞、砷等)等结合，具有整合解毒作用，在延缓衰老、增强免疫力、抗肿瘤等功能性食品广泛应用。谷胱甘肽是研究活性氧和自由基的重要指标，亦是机体氧化物牵累的重要指标。还原型谷胱甘肽(GSH)能可逆的转变为氧化型谷胱甘肽(GSSG)，其存在形式会随着细胞内代谢的情况而发生相互转变。
还原型谷胱甘肽(GSH)检测试剂盒(DTNB比色法)(GlutathioneAssayKit)是一种简单易行的检测还原型谷胱甘肽的试剂盒，其检测原理是待测样品中的还原型谷胱甘肽(GSH)与发色底物DTNB反应，产生稳定黄色的TNB和GSSG，通过分光光度法(分光光度计)测定nm处吸光度，与相应处理的GSH标准比较，获得样品的GSH含量。该试剂盒可用于检测植物组织、血浆、血清、动物组织、培养细胞等样品中还原型谷胱甘肽的含量。本产品仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
产品组成：
自备材料：
1.蒸馏水或去离子水、PBS或生理盐水
2.电子天平、匀浆器或研钵
3.低温离心机、离心管或小试管
4.水浴锅或恒温箱、分光光度计、比色皿
操作步骤(仅供参考)：
1.配制GSH提取液(1×)：取一份GSH提取液(3×)加入2份去离子水，即成。
2.配制DTNB显色液：量取25mlDTNB稀释液，将40mgDTNB加入稀释液中并充分溶解，即为DTNB显色液。也可以用精密天平称取DTNB粉末，配成终浓度为1.6%的DTNB显色液。配制好的DTNB显色液宜4℃保存，建议1个月内用完，最好现用现配。
3.配制GSH标准梯度并制作标准曲线：将GSH标准(1mM)用去离子水稀释成0.1mM的GSH标准溶液即GSH标准(μM)，然后按下表依次加入去离子水、GSHAssayBuffer和DTNB显色液，混匀，25℃保温反应10min。以0号管调零，用酶标仪nm测定各管吸光度值。以还原型谷胱甘肽(GSH)的浓度(μM)为横坐标，以吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
4.准备样品：
①植物组织样品：称取1g样品于研钵中，加入1~2ml经4℃预冷的GSH提取液(1×)，在冰浴条件下研磨匀浆后，于4℃r/min离心20min，收集上清液，用于GSH测定，并记录上清液总体积。
②动物组织样品：称取0.2g样品于研钵中，加入1ml经4℃预冷的GSH提取液(1×)，在冰浴条件下研磨匀浆后，于4℃r/min离心20min，收集上清液，用于GSH测定，并记录上清液总体积。也可以用液氮研磨匀浆。
③红细胞或血浆样品：取新鲜血液，r/min离心10min，沉淀为红细胞，上清为血浆。对于红细胞，用PBS洗涤两次，取约50μl红细胞沉淀或血浆，加入50μlGSH提取液(1×)，充分Vortex振匀。冰浴放置30min，4℃r/min离心20min，收集上清液，用于GSH测定。对于处理好的红细胞样品最后需用GSH提取液稀释10倍后再进行测定，而对于血浆样品，应直接取样测定。
④细胞样品：PBS洗涤细胞1次，离心收集细胞，吸尽上清，加入细胞沉淀3倍体积的GSH提取液(1×)，充分Vortex振匀(收集细胞前后分别对离心管进行称重，从而就可以计算出细胞沉淀的重量，10mg细胞沉淀的体积可以粗略地看做10μl)，对样品进行快速的冻融后，4℃或冰上孵育5min，4℃r/min离心20min，收集上清液，用于GSH测定。
5.GSH加样及检测：取5ml一次性离心管，按照下表顺序依次加入试剂，混匀，并注意避免产生气泡，25℃保温反应10min。1cm比色杯，以空白孔调零，用分光光度计nm测定各管吸光度值。如果样品中的GSH浓度过高，可减少样品用量或用GSH提取液(1×)适当稀释后再进行测定。
计算：
根据还原型谷胱甘肽(GSH)标准曲线和样品的吸光度值(样品测定孔吸光值-空白对照孔吸光值)，可计算出样品中GSH的浓度(μmol/L)和含量(μmol/g)。
组织细胞样品GSH(μmol/g)=C×VT×N/W
式中：C=从标准曲线上查得的GSH浓度(μmol/L)
VT=提取液总体积(L)
W=样品质量(g)
N=稀释倍数
注意事项：
1.建议第一次测定时先做2~3个样品的本底对照(空白对照)，如果样本空白对照与空白管非常接近，则说明样品液中不存在干扰物质，可以不再检测样本本底对照。如果样本空白对照与空白管有显著差异，则在测定每个样本时都需要做样本空白对照。
2.GSH比较稳定，血液样品以ACD抗凝后4℃冰箱保存，3周内稳定。
3.尽量使用新鲜的细胞或血液进行测定，而不要使用冻存的细胞或血液进行测定，避免使GSH活性下降。轻度溶血样本对GSH测定无影响。
4.全血GSH与吸烟量、体育锻炼成正比，与乙醇节制程度呈反比。成年人全血GSH的参考区间为1.02±0.17mmol/L。
5.动植物样品不能立即测定，应先加入GSH提取液匀浆处理，沉淀后去除蛋白质，防止蛋白质所含巯基及相关酶对测定结果产生影响。处理后的提取液可放入低温冰箱-70℃保存，但不宜超过10天。
6.测定各管时，各孔温度均需达到室温或25℃，否则影响测定结果。
7.测定时建议选用nm，亦可选用~nm。
8.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月有效。4℃运输，4℃保存。
