植物脱氢酶(PDHA)活性检测试剂盒(可见分光光度法)
产品货号:BA
产品规格:50管/24样
产品简介:
生物体的脱氢酶(Plantdehydrogenase,PDHA)的活性在很大程度上反映了生物体的活性状态,能直接表示生物细胞对其基质降解能力的强弱。
受氢体2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-TriphenylTetrazoliumChloride,即TTC)在细胞呼吸过程中接受氢以后,其还原产物三苯基甲替(TriphenylFormazone,即TFF)呈现红色,在波长nm处有最大吸收峰,采用分光光度法于nm测定其吸光值,即得植物脱氢酶活性。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品内容:
溶液的配制:
1.试剂一:使用前加少量水溶解,定容至30mL,避光、4℃保存(尽量现配现用);
2.试剂三:自备乙酸乙酯。
需自备的仪器和用品:
台式离心机、可见分光光度计、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、冰、研钵/匀浆器、蒸馏水、乙酸乙酯(不允许快递,请用户自备)。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
称取0.1g的植物组织,用双蒸水清洗3-4次,用滤纸吸干水分,备用。
二、测定操作表:
1.可见分光光度计预热30min以上,调节波长至nm,乙酸乙酯调零。
2.操作表:取5mLEP管依次加入
三、脱氢酶活力计算
酶活单位定义:在37℃时,每小时每克组织样本使反应体系吸光值每增加0.01为一个酶活单位。
脱氢酶活性(U/g/h)=ΔA÷0.01÷T÷W=33×ΔA÷W
T:反应时间,3h;W:样本质量,g。
注意事项:
1.配制好的试剂一避光保存于4℃,尽量在一周内使用,若出现红色,则不能使用。
2.试剂三易挥发,有毒,为了您的健康,请穿实验服,戴口罩,戴乳胶手套操作。
3.反应完成后立即冰浴以终止反应,并去除干净残留的反应液。
4.如果测定出来的吸光值较大,需把样本适当稀释再进行测定,注意计算公式乘以稀释倍数。