木聚糖酶检测试剂盒(DNS微板法)
产品货号：BA
产品规格：T
产品简介：
木聚糖(Xylan)是植物细胞壁的主要组成成分，它也是可利用的丰富的半纤维素。木聚糖酶(Xylanase)指能专一降解半纤维素、木聚糖为低聚木糖和木糖的一组酶的总称。木聚糖酶主要来源于细菌和真菌，包括厌氧菌、需氧菌、嗜温微生物、嗜热微生物和极端微生物等。
木聚糖酶主要包括3类：①β-1,4-D-内切木聚糖酶(EC3.2.1.8)，从木聚糖主链的内部切割β-1,4糖苷键，使木聚糖溶液的黏度迅速降低；②β-1,4-D-外切木聚糖酶(EC3.2.1.92)，以单个木糖为切割单位，作用于木聚糖的非还原性未端，使反应体系还原性不断增加；③β-1木糖苷酶(EC3.2.1.37)，切割低聚木糖，水解产物主要为木糖、木二糖及木三糖等低聚木糖。
根据酶的理化特性，木聚糖酶又可分为2大类：即分子量小于30ku的碱性木聚糖酶和分子量大于30ku的酸性木聚糖酶。通常细菌可以同时产生酸、碱性木聚糖酶，但真菌通常只产生低分子量的碱性木聚糖酶。从本质上讲，木聚糖酶都具有外切酶和内切酶活性，只是活性高低不同而已。作为一种工业用酶制剂，木聚糖酶具有潜在的应用价值。首先木聚糖酶可以将农业和木材工心的废物中的木聚糖转化为木糖，其次，Wong等建议木聚糖酶可应用在果汁澄清、咖啡、植物油和淀粉提取加工过程中。
木聚糖酶检测试剂盒(DNS微板法)检测原理是：木聚糖酶能将木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，在沸水浴条件下可以与3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂发生显色反应。反应液颜色的深度与酶解产生的还原糖量成正比，而还原糖的生成量又与反应液中木聚糖酶的活力成正比。因此，通过测定反应液颜色的强度，可以计算反应液中木聚糖酶的活力。本产品仅用于科研领域，不用于临床诊断或其他用途。
产品组成：
自备材料：
1.去离子水或蒸馏水
2.电子天平(精度0.g)、pH计、磁力搅拌器、移液器、小烧杯
3.振荡器、纱布、离心机、离心管或试管、三角瓶、容量瓶、
4.水浴锅、电热炉、培养箱、酶标仪、酶标板
操作步骤(仅供参考)：
1.配制木聚糖溶液：准确称取0.15g木聚糖，使充分溶解于8ml去离子和5mlNH水溶液(3×)中，通过pH计测定，用YS溶液调节pH至5.5~5.6，补水至15ml，木聚糖终浓度为10mg/ml，4℃避光保存，48小时有效。
2.配制NH水溶液(1×)：取1份NH水溶液(3×)和2份去离子水混合即成。
3.标准曲线绘制：取8支离心管按下表设置，准确吸取木糖标准(10mg/ml)与Assaybuffer即得不同浓度的木糖梯度标准。
取1支离心管，加入0.08mlAssaybuffer和0.1mlDNS试剂，混匀，沸水浴加热5min，自来水冷却至室温，加NH水溶液(1×)0.32ml，即为空白管。另取7支离心管，加入0.04ml37℃预热的Assaybuffer、0.04ml木糖梯度标准和0.1mlDNS试剂，混匀，沸水浴加热5min，自来水冷却至室温，加NH水溶液(1×)0.32ml，即为标准管。以空白管调零，酶标仪测定nm处各管的吸光度。
4.准备样品:
①固体样品按照下表中建议的称样量称取试样两份，精确至0.g。加入4mlAssaybuffer，充分溶解，并定容至10ml，在4℃条件下避光保存1~2h。0g离心3~5min取上清液，再用Assaybuffer做适当稀释、定容(稀释后的酶液中木聚糖酶活力最好能控制在0.04~0.10U/ml之间)。
②液体样品可以直接用Assaybuffer稀释、定容(稀释后的酶液中木聚糖酶活力最好能控制在0.04~0.10U/ml之间)。如果样品稀释后酶液的pH偏离5.4~5.7，需要用乙酸溶液或氢氧化钠溶液校正至5.4~5.7。
5.测定样品
①取适量的木聚糖溶液和酶提取液置于不同的离心管中，37℃平衡20min；木聚糖溶液使用之前应充分摇匀。
②取2支离心管按下表设置依次加入相应试剂：
以空白管调零，酶标仪测定nm处对照管和测定管的吸光度(分别记为A1、A0)。
计算:
木聚糖酶活力单位定义：在37℃pH5.5的条件下，每分钟从浓度为5mg/ml的木聚糖溶液中降解释放1μmol还原糖所需要的酶量为一个酶活力单位U。根据酶活性定义，可计算出样品中的木聚糖酶活性。
以系列木糖标准(mg/ml)(1~7号)为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。根据标准曲线计算出酶提取液(对照管和测定管)的吸光度相对应的木糖浓度C，根据下式再计算木聚糖酶活性。
D1=N×(C1-C0)×0/(1×M×t)=N×(C1-C0)×0/
D2=D1×V0/m
式中：D1—稀释酶液中木聚糖酶的活力，单位为U/ml或U/g
N—样品稀释倍数
C1—样品测定管木糖浓度，单位为mg/ml
Co—样品对照管木糖浓度，单位为mq/ml
0—转换因子，1mmol=0umol
M—木糖的摩尔质量，单位为g/mol(=.2)
T—酶与底物的反应时间，单位为min(=30)
D2—固体样品中木聚糖酶的活力，单位为U/g
V0—固体样品的酶提取液总体积，单位为ml
m—称取样品的质量，单位为g
注意事项：
1.木糖标准应避免反复冻融，以免失效或效率下降。
2.木聚糖易溶于碱性溶液中，加入YS溶液后呈悬浊状，静置后可能分层，为减少实验误差，后续实验使用时应摇匀。
3.待测酶提取液样品如不能及时测定，应置于-20℃保存，3天内稳定。
4.如果样品酶活性过高，应用Assaybuffe稀释酶提取液后重测，结果乘以稀释倍数。
5.木聚糖酶的最适pH一般在5.5。如果样品稀释后酶液的pH偏离5.4~5.7，需要用乙酸溶液或氢氧化钠溶液校正至5.4~5.7
6.本试剂盒适用于饲料等样品的木聚糖酶活性的测定。
7.Assaybuffer如不够用，可用乙酸钠缓冲液(01mol/L,pH5.5-6.0)替代。
8.DNS试剂、NH水溶液(2×)和YS溶液有一定的腐蚀性和刺激性，应小心操作。
9.沸水浴实验操作时，应当选择带螺旋盖的离心管。
10.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月有效。低温运输，按要求保存。