一、概况
肉毒碱(3-羟基-4-三甲基氨基丁酸)和它的邻位酰酯都已在肌肉组织、酵母及植物中发现，但自然界里只有L-型的异构体存在。
由于肉毒碱和它的酰基酯之间很易建立平衡，因此样品一日收集后就应迅速冰冻防止其处于流动状态，pH必须控制在8.5以下以避免水解。
二、肉毒碱乙酰基转移酶检测肉毒碱
肉毒碱乙酰基转移酶(乙酰CoA:肉毒碱邻-乙酰基转移酶ACT，EC)专一地催化单羧酸残基从C2到C10的转移.
酶检测的最适pH为8.0；D-肉毒碱不反应。
在反应中产生的CoA是巯基化合物,因此最常用的检测法是使之和一种55-二硫代-(2-硝基苯甲酸)的巯基试剂反应形成黄色的5-硫代-2-硝基苯甲酸阴离子在nm有强的吸收，测定吸光率的变化ΔA，便可计算出肉毒碱的浓度。
另一种较灵敏的方法是偶联一个酰基-CoA合成酶[酸:CoA合成酶(AMP)，EC.6.2.1.3]系统，检测反应释放的CoA：
山梨酰-CoA在nm有吸收带，测定其吸光率的增加就能确定L-肉毒碱的含量。
应用此法的困难在于酰基-CoA合成酶没有商品供应，必须自己制备，牛肝线粒体酶的纯化方法已有报道。反应是高度专一的(只有正肉毒碱作为底物时产生干扰，但此化合物在生物学材料中并未找到)而且是准确的(变异系数=1.5%)。
三、酶法检测乙酰肉毒碱
乙酰肉毒碱可以通过上述反应的逆反应进行检测：
总反应:
在这里，偶联反应要用到柠檬酸合成酶(柠檬酸草酰乙酸解酶，CS，E.C.4.1.3.7)和MDH(L-苹果酸:NAD氧化还原酶，E.C.1.1.1.37)，然后测定NADH在nm吸光率的升高。所有试剂都有商品供应，而且未遇到严重的干扰。
上述反应也可用荧光光度法检测NADH，这样能获得更高的灵敏度。